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人(THSD7A)ELISA试剂盒,反应蛋白7A域检测原理及范围

点击次数:388 发布时间:2019-03-04

人(THSD7A)ELISA试剂盒,反应蛋白7A域检测原理及范围

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人反应蛋白7A域(THSD7A)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人反应蛋白7A域(THSD7A)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

注意事项:

  • 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
  • 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
  • 消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。
  • 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。
  • 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
  • 在储存和温育时避免强光直接照射。
  • 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
  • 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
  • 不能使用过期产品。
  • 如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置

操作步骤

  1.   从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
  2.   设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
  3.   样本孔待测样本50μL;空白孔不加。
  4.   除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
  5.   弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
  6.   每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7.   每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
  •  检测范围3.75 ng/mL  120 ng/mL
  •  灵敏度:最低检测浓度小于0.1 ng/mL
  •  特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
  •  重复性:板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15% 

 

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