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科研ELISA试剂盒不适用于测定半抗原及小分子单价抗原

点击次数:395 发布时间:2018-06-26

科研ELISA试剂盒的关键技术参数包括板内差异性、板间差异性、批间差异性、重复性、特异性及交叉反应性、回收率等。如果实验君经常开展ELISA实验,建议使用同一厂家的试剂盒,这样可尽量保证数据的重复性(当然前提是实验条件的一致性)。对于科研用的定量ELISA试剂盒,不同的生产厂家使用的抗体对、酶以及底物、生产工艺和研发实力不尽相同,自然不同厂家试剂盒测出的数据会有差异。
一般的科研ELISA试剂盒都经过血清、血浆和细胞培养上清液的验证。在选择试剂盒时,好要详细阅读说明书,比如血浆样本抗凝剂的使用是否与试剂盒兼容。另外,在某些情形下样品中会存在干扰因素比如溶血血浆、高脂肪含量的样品、人抗鼠抗体(HAMA)、细胞培养上清中含胎牛血清等。因此需根据样品来选择试剂盒,必要时还要根据样本来适当优化。或在样品收集前,好先阅读一些可靠供应商试剂盒的说明书或直接咨询。如果您的样品为组织或细胞裂解物,则需要更谨慎的选择试剂盒。市面上大多数的商业化试剂盒没有经过多种来源组织样本的验证。这需要实验君能理解不是所有试剂盒所用的抗体对,都能特异的从一堆裂解物蛋白中特异检出您的目的蛋白,还要考虑组织样品的基质效应等。但如果实验君要了解组织样品的制备问题,我们另起一文来总结。
科研ELISA试剂盒技术可用于测定抗原,也可用于测定抗体。ELISA方法中有三个必要的试剂:
(1)固相的抗原或抗体,即"免疫吸附剂";
(2)酶标记的抗原或抗体,称为"结合物";
(3)酶反应的底物。
一般可将科研ELISA试剂盒分为以下几种类型,实验君首先需要根据自己的待检物来确定试剂盒类型。
1)科研ELISA试剂盒双抗体夹心法:针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相捕获抗体和酶标检测抗体。适用于测定二价或二价以上的大分子抗原如血浆中的细胞因子,科研ELISA试剂盒不适用于测定半抗原及小分子单价抗原。同理,也有双抗原夹心法测抗体。
2)科研ELISA试剂盒直接法:将抗原直接固定在固相载体上,加入酶标记的一抗,即可测定抗原总量。此法操作手续简短,因无须使用二抗可避免交互反应。
3)间接法:间接法是检测抗体常用的方法,其原理为利用酶标记的抗抗体(抗人免疫球蛋白抗体)来检测与固相抗原结合的待检抗体。
4)科研ELISA试剂盒竞争法:小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点,因此不能用双抗体夹心法进行测定,可以采用竞争法模式。当抗原材料中的干扰物质不易除去,或不易得到足够的纯化抗原时,可用此法检测特异性抗体。

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