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分享大鼠ELISA试剂盒的免疫吸附测定

点击次数:675 发布时间:2017-12-28

大鼠ELISA试剂盒本办法要着重留意的是RF(1gM类)及其他非特异IgM的搅扰。RF(1gM类)因为其能与固相抗人u链抗体,并可与随后参加的酶标抗体(动物IgG)反响,然后导致假阳性反响。而非特异IgM因为其在*步温育中,可与特异IgM竞争与固相抗体,所以会影响测定的灵敏度。因而,运用本法测IgM,必须对临床样本进行恰当稀释。样本稀释后,大鼠ELISA试剂盒上述产生搅扰效果的非特异IgM含量削减,而特异IgM因为处于相应病原体的急染期,滴度很高,必定稀释后,不会有显着影响,况且,在某些病原体如HBV的慢染期间,IgM类特异抗体也能继续存在,只不过滴度要低许多。
因而,在运用直接法测定IgM抗体时,一般须将血清样本用抗人IgG抗体或A预处理,以去掉IgG的搅扰。这么不但测定较为繁琐,并且影响测定的特异性和灵敏度。现在,常用的IgM抗体检查办法为捕获法,即以抗人IgM抗体(抗人u链)作为固相抗体,大鼠ELISA试剂盒当参加血清标本时,其间的IgM类抗体(特异的和非特异的)即可被固相抗体捕获,再参加特异抗原,其与固相上捕获的IgM抗体后,参加酶标抗特异抗原的抗体,zui终参加底物显色。
大鼠ELISA试剂盒具体操作步骤如下:
1.首先将抗人IgMbt链抗体于碳酸盐缓冲液中40c下过夜包被聚苯乙烯等固相,构成固相抗体,洗刷去掉未与固相或不紧的抗体后,用小牛血清或牛血清白蛋白等封闭,洗刷去掉未的部分及杂质。
2.参加含待测IgM抗体的临床样本如血清等,温育必定时刻后洗板;此刻,待测样本中的IgM抗体就会与固相上的抗P链抗体反响而吸附于固相上。
3.参加特异的抗原如HAV抗原、HBcAg等,温育必定时刻后洗板;此刻,特异抗原就会与固相上的特异IgM抗体发生反响。
4.参加酶符号的抗特异抗原的抗体,温育必定时刻后洗板;此刻,在固相上即构成相应的抗原抗体复合物。

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